I. Qué es un matraz de cultivo celular?
Un matraz de cultivo celular es un instrumento de laboratorio común utilizado para el cultivo celular. Está fabricado con poliestireno (PS) de alta calidad, mediante moldes de ultraprecisión y procesos de producción totalmente automatizados. Este producto se utiliza para el cultivo celular en laboratorio; sus excelentes propiedades ópticas facilitan la observación microscópica y su superficie está tratada con TC para una mejor adhesión celular.
II. Inoculación de la suspensión celular en el matraz de cultivo
1. Mezcla de la suspensión celular: Prepare la suspensión celular según la concentración experimental requerida y mézclela completamente en un matraz de cultivo, recipiente de cultivo u otro contenedor.
2. Con una pipeta o pipeta Pasteur, inyecte la suspensión celular en el matraz de cultivo celular de forma lenta y constante, evitando salpicaduras o formación de espuma. (En el caso de matraces de cultivo celular multicapa, es fundamental asegurar una distribución uniforme del líquido; inclinar o girar el matraz puede contribuir a un flujo uniforme del líquido en cada capa).
3. Coloque con cuidado el matraz de cultivo sobre una superficie de trabajo estable, asegurándose de que la cara lisa y plana quede hacia arriba y la cara con gradiente hacia abajo (diseño apilable para facilitar su manejo).
4. Coloque el matraz de cultivo celular en una incubadora adecuada y ajuste la temperatura (p. ej., 37 °C), la humedad y la concentración de gas (p. ej., 5 % de CO₂) apropiadas.
5. Deje que las células crezcan en el matraz de cultivo durante un tiempo determinado.
III. Cambio del medio de cultivo
1. Retirada del medio de cultivo antiguo: Al aspirar el medio de cultivo, incline el matraz a 45 grados con la superficie lisa hacia usted. Aspire suavemente el medio de cultivo antiguo con una pipeta Pasteur o una pipeta normal, con cuidado de no desprender las células adheridas. Si hay muchas células en suspensión o impurezas en el medio de cultivo, lave las células una o dos veces con tampón PBS para eliminarlas.
2. Adición de medio de cultivo nuevo: Tras retirar el medio de cultivo antiguo, añada una cantidad adecuada de medio de cultivo al matraz. Añada el medio desde la pared lateral del matraz para evitar el impacto directo sobre las células adheridas. La cantidad de medio de cultivo fresco que se añada debe determinarse en función de la densidad celular y la tasa de crecimiento para asegurar un crecimiento celular normal.
IV. Recolección de células
1. Eliminación del medio de cultivo antiguo: Aspire suavemente el medio de cultivo antiguo del matraz de cultivo celular, añada una cantidad adecuada de tampón PBS y agite suavemente para eliminar cualquier resto de medio de cultivo, asegurándose de que la superficie celular quede limpia.
2. Digestión y terminación de la digestión celular: Añada una cantidad adecuada de tripsina (≥3 ml) para la digestión durante 2-3 minutos, y luego detenga la digestión con medio de cultivo que contenga suero.
3. Recolección de células: Transfiera la suspensión celular a un tubo de centrífuga con una pipeta (evitando la formación de espuma) y centrifugue a una velocidad adecuada (p. ej., 800 rpm) durante 5 minutos para que las células se sedimenten en el fondo del tubo.
4. Recolección del precipitado celular: Después de la centrifugación, deseche suavemente el sobrenadante del tubo de centrífuga (no deseche el precipitado celular). Recoja el precipitado celular del tubo de centrífuga y proceda con el procesamiento posterior según sea necesario para el experimento.