PCR: reacción en cadena de la polimerasa, que utiliza ADN para desenrollarse (desnaturalizarse) in vitro a 95 ° C.A 55 ° C, los cebadores y las hebras simples se combinan (hibridación) de acuerdo con el principio de emparejamiento complementario de bases, y luego se ajusta la temperatura a alrededor de 72 ° C, la ADN polimerasa sintetiza hebras complementarias (se extiende) a lo largo de la dirección desde el ácido fosfórico hasta cinco azúcares de carbono (5'-3 ').
El instrumento de PCR es en realidad un dispositivo de control de temperatura, que puede realizar un buen control de temperatura entre 95 ° C, 55 ° C y 72 ° C.
De acuerdo con el propósito de los estándares de amplificación y detección de ADN, los instrumentos de PCR se pueden dividir en: instrumentos de PCR ordinarios, instrumentos de PCR en gradiente, PCR in situ, instrumentos de PCR cuantitativa fluorescente en tiempo real, etc.
①Máquina de PCR ordinaria
Generalmente, una máquina de PCR que solo puede ejecutar una temperatura de hibridación específica para una amplificación de PCR se denomina máquina de PCR ordinaria, que también es una máquina de PCR tradicional. Si desea utilizarlo para diferentes temperaturas de recocido, debe ejecutarlo varias veces.
Las máquinas de PCR ordinarias se utilizan principalmente en investigación científica, docencia, medicina clínica, inspección, cuarentena, etc.
②Instrumento de PCR de gradiente
La amplificación por PCR de una sola vez puede establecer una serie de diferentes condiciones de temperatura de hibridación (generalmente 12 gradientes de temperatura) denominada instrumento de PCR de gradiente. Los diferentes fragmentos de ADN tienen diferentes temperaturas de hibridación óptimas. Al establecer una serie de temperaturas de hibridación de gradiente para la amplificación, la amplificación por PCR única puede seleccionar la temperatura de hibridación más adecuada con un alto nivel de expresión para una amplificación eficaz.
El instrumento de PCR gradiente se utiliza principalmente para estudiar la amplificación de la temperatura de hibridación de ADN desconocida, lo que ahorra tiempo y dinero. También se puede utilizar como una PCR ordinaria sin establecer un gradiente. El instrumento de gradiente de PCR se utiliza principalmente en investigación científica, instituciones de enseñanza, inspección, cuarentena, etc.
③Máquina de PCR in situ
La PCR es para extraer ADN de células o tejidos para la reacción de amplificación de genes, mientras que la PCR in situ es para mantener la integridad de las células o tejidos, hacer que el sistema de reacción de PCR penetre en los tejidos y las células y realice genes en la ubicación del ADN diana de la célula. Amplificación. No solo se puede detectar el ADN diana, sino también el tipo de célula en la que existe el ADN diana, lo que es más propicio para explorar la relación entre el ADN diana y la célula.
El instrumento de PCR in situ se utiliza principalmente para: (1) Detectar fragmentos de genes exógenos, aumentar la tasa de detección, centrándose en la inspección de infecciones virales, como VIH, VPH, VHB, CMV, etc .; (2) Observación de la Distribución de patógenos en el cuerpo Ley (3) Fragmentos de genes endógenos, como enfermedades monogénicas humanas, genes recombinantes, cromosomas translocados, fragmentos de ARNm de Ig, fragmentos de oncogén, etc. (4) Detección de genes introducidos; (5) Detección de enfermedades genéticas como la β-talasemia.
④Instrumento de PCR cuantitativa fluorescente en tiempo real
El sistema de adquisición de señales fluorescentes y el sistema de procesamiento y análisis informático se añaden sobre la base del diseño del instrumento de PCR ordinario para formar un instrumento de PCR con función cuantitativa de fluorescencia. El principio de la amplificación por PCR es el mismo que el de la amplificación por PCR ordinaria. Los cebadores añadidos durante la amplificación por PCR se marcan con isótopos, fluoresceína, etc., y los cebadores y las sondas fluorescentes se utilizan para unirse específicamente a la plantilla al mismo tiempo para amplificación. El resultado amplificado se conecta al sistema de procesamiento y análisis por computadora a través de la señal de adquisición en tiempo real del sistema de adquisición de la señal de fluorescencia, y se obtiene la salida del resultado cuantificado en tiempo real.
Las máquinas de PCR cuantitativa de fluorescencia se dividen en monocanal, doble canal y multicanal. Cuando solo se usa una sonda fluorescente para el etiquetado, use un solo canal; cuando haya múltiples etiquetas fluorescentes, use múltiples canales. Un solo canal también puede detectar marcadores de multifluorescencia y productos de expresión de genes diana, porque solo se puede detectar una cantidad de amplificación del gen diana a la vez, y se requieren múltiples amplificaciones para detectar la cantidad de diferentes fragmentos de genes diana. Los canales múltiples son propicios para la PCR multiplex y realizan la función de detectar múltiples genes diana a la vez.
El instrumento de PCR cuantitativa de fluorescencia se utiliza principalmente en pruebas médicas clínicas, investigación y desarrollo de biomedicina, industria alimentaria, instituciones de investigación científica, etc. La tecnología de detección cuantitativa de fluorescencia tiene muchos aspectos del diagnóstico clínico, centrándose principalmente en el diagnóstico clínico de enfermedades causadas por diversos patógenos, como las enfermedades de la hepatitis, las enfermedades venéreas, las enfermedades relacionadas con la atención prenatal y posnatal y la tuberculosis.