Método de amplificación:
PCR de fluorescencia isotérmica: en la PCR de fluorescencia isotérmica, la amplificación del ADN se produce a una temperatura constante. Esto significa que la reacción tiene lugar a una temperatura única y constante durante todo el proceso.
PCR en tiempo real: La PCR en tiempo real, también conocida como PCR cuantitativa (qPCR), utiliza un proceso de ciclado térmico. Implica múltiples ciclos de temperatura, incluidos pasos de desnaturalización, recocido y extensión. Estos ciclos de temperatura normalmente están controlados por una máquina termocicladora.
Control de temperatura:
PCR de fluorescencia isotérmica: como su nombre indica, la PCR de fluorescencia isotérmica mantiene una temperatura constante durante la reacción, normalmente entre 60 y 65 ℃. Esto simplifica el equipo necesario para la reacción en comparación con la PCR en tiempo real.
PCR en tiempo real: La PCR en tiempo real implica ciclos térmicos, donde la temperatura cambia repetidamente entre diferentes niveles (por ejemplo, desnaturalización alrededor de 95 ℃, recocido alrededor de 55-65 ℃ y extensión alrededor de 72 ℃). Esto requiere un termociclador con control preciso de la temperatura.
Método de detección:
PCR de fluorescencia isotérmica: la detección de fluorescencia se utiliza tanto en la PCR de fluorescencia isotérmica como en la PCR en tiempo real. Sin embargo, en la PCR de fluorescencia isotérmica, las señales de fluorescencia generalmente se detectan continuamente sin la necesidad de realizar ciclos entre diferentes pasos de temperatura.
PCR en tiempo real: en la PCR en tiempo real, las señales de fluorescencia se miden después de cada ciclo de cambio de temperatura (normalmente después del paso de recocido/extensión). Esto permite el seguimiento en tiempo real de la amplificación del ADN tal como ocurre durante el proceso de ciclo térmico.
Aplicaciones:
PCR de fluorescencia isotérmica: esta técnica es adecuada para determinadas aplicaciones, como pruebas rápidas en el lugar de atención, donde la simplicidad y la velocidad son esenciales. Puede utilizarse para la detección cualitativa de secuencias de ADN específicas.
PCR en tiempo real: La PCR en tiempo real se utiliza ampliamente para el análisis de ADN tanto cualitativo como cuantitativo. Es muy sensible y permite medir la cantidad inicial de ADN en una muestra, lo que lo hace útil para aplicaciones como análisis de expresión genética, cuantificación de carga viral y genotipado.
En resumen, la principal diferencia entre la PCR de fluorescencia isotérmica y la PCR en tiempo real es el control de temperatura y el método de amplificación. La PCR de fluorescencia isotérmica mantiene una temperatura constante durante toda la reacción y es adecuada para aplicaciones más simples y rápidas, mientras que la PCR en tiempo real implica ciclos térmicos y se utiliza para una amplia gama de aplicaciones de análisis de ADN cuantitativas y cualitativas.